Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身突变到再次出现1M-乳癌药理学征状的重大突破率在青极多年时期就有很差的描述，多个胰脏自身突变白血病的青极多年中会有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的青极多年这一比重增加到84%。整体而言，占多数药理学1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的发病机制还从未赢取充分的研究课题。

越来越多的人开始用作分期系统来定义1M-乳癌的重大突破：幼体在再次出现多种胰脏自身突变时重回第1之前，再次出现血糖所致时重回第2之前，再次出现征状时重回第3之前。一些多发胰脏自身突变白血病的幼体，在1期和2期，重大突破较很慢，并发展为发病的1M-乳癌。我们之前描述了一小组在首次检测到多种胰脏自身突变抽取后有数10年无乳癌的极很慢重大突破者，这小组病患者人数极多，但不同之处非常明确。随后，我们见到胰脏自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞中间体将在重大突破较快的病患者中会基本不存在，但在近期发病和长期以来存在的乳癌病患者中会很更容易检测到。这可能暗示，与重大突破病患者相比较，这些病患者诱发中间体将的闭环增强。

早期研究课题暗示，尽管闭环性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但乳癌病患者存在一些功能毛病，其中会包括对IL-2的中间体将并能降低。此外，乳癌病患者中会的振荡CD4+T巨噬细胞可能对闭环突显抵抗性，表现为振荡T巨噬细胞的抑止西移动，自然产生的Treg和体外产生的抑制Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2中间体将西移动。本研究课题的借此是描述了CD4+闭环性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较快重大突破者中会的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以年轻人蓝本的纵向研究课题，在21岁以下确诊的病患者亲属中会检查1M-乳癌的危险因素。我们之前描述了长期以来较快重大突破者的不同之处，他们保持多重胰脏自身突变白血病超过10年，但从未再次出现乳癌的药理学征状，很慢性或非来进行性诱发。随后，10名继续保持无乳癌并愿意透过大量血液抽取的较快重大突破者纳入T和B巨噬细胞功能分析。在目前的研究课题中会，8名很慢重大突破者(SP小组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身突变白血病。所有的大多数人都正处于1M-乳癌重大突破的1期，尽管一些人随后耗尽了胰脏自身突变对某些抗原的抽血，然而，一名病患者已经正处于2期有数6年，但从未再次出现药理学征状，一名病患者被诊断为乳癌，该受试者72岁，在搜集检验抽取时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该NAD来进行了实际上审计。转化外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多给定流式巨噬细胞术和T巨噬细胞抑止试验审计NAD中会Treg的频率、表M-和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和重返)来进行无行政官员聚类分析，审计Treg表M-。

结果：与生活品质NAD相比较，来自很慢重大突破体的知觉CD4+T巨噬细胞的行政官员聚类结果显示，激活的知觉CD4+ Treg频率增加，与糖皮质激素抑制的TNFR无关蛋白(GITR)强调增加有关。一名HbA1c增大的病患者与重大突破较快者和意味着的大鼠相比较，Treg小曲有所并不相同。功能分析暗示，与生活品质NAD相比较，来自较快重大突破体的Treg细胞内的CD4+振荡T巨噬细胞抑止明显受损。表现为对振荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134强调的抑止增加。

示意图1 深入的表M-分析结果显示，CD4+Treg亚M-在很慢重大突破队列中会增加。由FlowSOM填充的Treg室，有数在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上标物强调鉴定出10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用作9个并不相同Treg上标填充的10个元簇的MST。每个终端代表者一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端小组周围装裱。每个终端中会的饼示意图问到单个上标的强调档次。(b)每个元聚类的热示意图，以结果显示整体上标强调。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)填充示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装等分(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。深蓝色红色代表者捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用作CITRUS的预测模M-证实，Treg频率的增加是重大突破较快的标志。标准门控(a - f)和果树分析(g-k)相对SP大多数人和意味着的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调来进行转化，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)小组以及NADSP 606(深蓝色)中会CD25+ cd127的频率汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控弟集的装等分;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，左下角明显的簇被识别为SP和HD队列中间的并不相同。(j)装等分结果显示了在SP(布氏)和HD(灰点)小组中会，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比重)。(k)加权结果显示每个簇的表M-(粉红色)和Treg上标一般来说强调与氛围强调(黄色);上列，寄存器Treg_3;下面几天后，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中会上标的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

示意图3 与生活品质献血者相比较，重大突破较快者知觉treg的GITR增加。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调串联，结果显示加权(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NAD包括，p< 0.05(黄色)NADSP 606和意味着的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR强调，从标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(深蓝色)串联，结果显示加权(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

示意图4 来自较快重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制振荡CD4+T巨噬细胞的并能降低。SP小组用黄色的线和红色问到，HD小组用黑色的线和红色问到，深蓝色的线/红色问到NADsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养3同一天来进行流式巨噬细胞术检测。(a-d)与CD4+应将答者一般来说应将的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比率。用作白血病对照(激活的响应将巨噬细胞不含treg)计算抑止比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

示意图5 振荡CD4+T巨噬细胞对较快重大突破的T巨噬细胞重置的抑止更极端。SP小组用黄色的线和红色问到，HD小组用黑色的线和红色问到，深蓝色的线/红色问到NADsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel上标，treg按观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养3同一天来进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因弟分析。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中会的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

结论：我们得出的结论是，来自较快重大突破弟的重置知觉CD4+Treg在GITR强调中会赢取了扩展和丰富，强调了促使研究课题Treg在1M-乳癌可能会幼体中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28